Donkey Kong 64 comienza con una vista al lugar donde sucede la mayor parte del juego: Donkey Kong Island (no es igual a la de la saga de Donkey Kong Country). Luego, se muestran los planes de King K. Rool de destruir dicha isla. Para distraer a Donkey Kong, ordena secuestrar a sus amigos y robar sus Bananas (201 en total). Luego, Donkey Kong es avisado por Squawk el loro, y de inmediato se pone en acción.